希凯生物是Anatrace授权代理商,提供膜蛋白研究试剂:磷脂、去垢剂,生化试剂等
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膜蛋白是生物膜功能的主要执行者,在生物体内参与许多重要的生理过程。由于很难获得稳定均匀且维持膜蛋白正确构象的膜模拟环境,膜蛋白研究远远滞后于水溶性蛋白。磷脂纳米盘(Nanodisc)是由高密度脂蛋白发展而来的用于膜蛋白研究的新类型膜结构。将膜蛋白与Nanodisc组装起来,是膜蛋白研究的有效方法。制备纳米盘的一种常用方法是将苯乙烯-马来酸(SMA)添加到完整的细胞膜上,从而自发地生成SMA-脂质颗粒(SMALP)的纳米盘。
Anatrace提供新一代 苯乙烯-马来酸酐共聚物(SMA)系列衍生物产品。
SMA-EA,Styrene Maleic Acid – Ethanol Amine copolymer, sodium salt
SMA - ED,SMA derivatized with ethylenediamine
SMAd-A,Styrene Maleimide-Amine copolymer, Dehydrated SMA Ethylenediamine copolymer
SMA-QA,Styrene Maleimide Quaternary Ammonium copolymer
对高浓度的二价阳离子(200 mM Ca2+ 或Mg2+)表现出更高的稳定性,可通过改变脂质与聚合物的比例,允许使用各种尺寸的 Lipid Nanodiscs 。 这些产品已被证明可以与合成脂质形成 Nanodiscs [1],并直接从膜中溶解膜蛋白[2]。洗涤剂经常干扰蛋白质的结构和功能,并可能导致变性,因此这些新聚合物是去垢剂的绝佳替代品。其溶解方案简单明了(Figure 1)。
膜蛋白溶解方案
为了溶解来自天然脂双层的膜蛋白,可以将聚合物直接添加到已在缓冲液中重悬至最终浓度为 1% – 3% 的分离膜制剂中。聚 合物可以作为SMA的粉末或原液加入到缓冲液中(新SMA聚合物的pH稳定性见图2;每种情况下的最佳pH值可能略有不同)。
溶解在室温或 4°C 下进行,同时轻轻摇动溶液。
溶解在 SMA 聚合物中的膜蛋白与所有常用的蛋白质纯化技术兼容,包括 IMAC、亲和、离子交换和 SEC。
在 SMA 中溶解和纯化的膜蛋白与大多数生物物理表征分析兼容,包括 SEC、SDS-PAGE、DLS、TEM 和 NMR 光谱。
制备 DMPC Nanodiscs方案
使用 DMPC (10 mg/ml) 在 pH 7.4 的 50 mM 磷酸钾中作为储备溶液制备具有不同聚合物的Nanodiscs。 聚合物原液在缓冲液中制备为10mg /ml (pH值的选择,见图2)。
通过添加 2:1 w/w SMA-EA (10 mg/ml) 和 DMPC (10 mg/ml) 制备 SMA-EA Nanodiscs,然后在 37°C 下孵育 4 小时。
通过添加 1.5:1 w/w SMA-QA (10 mg/ml) 和 DMPC (10 mg/ml) 制备 SMA-QA Nanodiscs,然后在 37°C 下孵育 4 小时。
可以使用体积排阻色谱法纯化Nanodiscs,并且可以使用动态光散射评估它们的尺寸。
我们建议在 50 mM 磷酸钾缓冲液 (pH 7.4) 中使用Nanodiscs溶液 (100:1 DMPC:protein) 将目标蛋白孵育 12 小时。